FUJIFILM Wako質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
125-05061,質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶Lysyl Endopeptidase®產(chǎn)品簡介:產(chǎn)品品牌:Wako產(chǎn)品名稱:質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶LysylEndopeptidase®產(chǎn)品貨號:125-05061FUJIFILM Wako質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
125-05061,質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切meiLysyl Endopeptidase®
125-05061,質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切meiLysyl Endopeptidase®產(chǎn)品簡介:
產(chǎn)品品牌:Wako
產(chǎn)品名稱:質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切meiLysylEndopeptidase®
產(chǎn)品貨號:125-05061
產(chǎn)品規(guī)格:20 ug×5
FUJIFILM Wako質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶
本產(chǎn)品是質(zhì)譜分析前處理時常用的蛋白分解mei即賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei,該mei可以特異性切除賴氨suan基團(tuán)C末端的多肽,可用于蛋白測序分析和 Lys-X 化合物的mei合成。若同時使用賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei和胰mei,可更好地切斷賴氨suan基團(tuán)的多肽,增加多肽的數(shù)量。產(chǎn)品已按照使用習(xí)慣做成小包裝,是方便使用的冷凍干燥品。20 μg/支可用于100-200個樣品的凝膠內(nèi)消化。
來源:細(xì)菌
外觀:凍干粉(包含2 mmol/L Tris-HCl 緩沖液,pH8)
活性:0.03~0.07 AU/vial
分子量:27,000(瓊脂糖過濾),30,000(SDS-PAGE)
溶解性:溶于水或緩沖液
穩(wěn)定性:溶解于 pH 值 5.0-12.0 的 Tris 緩沖液中,可在4℃穩(wěn)定保存2年;在 pH 值 6.0-11.0、30℃時能穩(wěn)定保存,但溫度超過50℃時不穩(wěn)定。
最適pH值:9.0~9.5
等電點:6.9~7.0
底物特異性:
可水解底物——Tos-Lys-OMe、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA
不可水解底物——Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNA、Arg-pNA
抑制劑:DFP、PMSF、TLCK
◆特點
● 高特異性、高蛋白質(zhì)消化率、適用于蛋白質(zhì)譜分析
● 提高裂解效率、增加肽段數(shù)量
● 根據(jù)使用量特意制備小包裝,方便使用
◆應(yīng)用
分別采用胰蛋白mei(Tp)、賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei(Lys-C)和 Tp與Lys-C 聯(lián)用進(jìn)行膠內(nèi)mei切的效果比較。
牛血清蛋白 BSA 的條帶(100 ng)通過 SDS-PAGE 獲得,然后分別用 Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 進(jìn)行mei切,再用 MALDI-TOFMS 法進(jìn)行分析。
這些蛋白mei的實驗效果見下表。
表 1:Tp、Lys-C 和 Lys-C+Tp 的結(jié)果對照
這些結(jié)果表明 Lys-C mei解的錯誤裂解率*低。Tp mei解時加入 Lys-C 后,錯誤裂解率有所降低,同時,可以鑒定出更多的多肽。
Tp  | Lys-C  | Lys-C+Tp  | |
裂解位點  | 精氨suan和賴氨suan的C端  | 賴氨suan的C端  | 精氨suan和賴氨suan的C端  | 
錯誤裂解率 (錯誤裂解所占比例 )  | 多(8%)  | 很少(0%)  | 少(3%)  | 
鑒定出的多肽數(shù)量  | 17  | 19  | 22  | 

 
胰蛋白mei(Tp)(圖 a)和賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei(Lys-C)+Tp( 圖 b)mei切后的質(zhì)譜結(jié)果對照圖。
Lys-C+Tp mei切后,可以在 m/z=2000 時得到吸收峰,而單獨的 Tp mei切在 m/z=2000 時沒有吸收峰。該結(jié)果表明 Lys-C 可以提高測序覆蓋度。
( 數(shù)據(jù)由大阪醫(yī)療中心和婦嬰健康研究所Y. Wada 博士提供 )
賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei
賴氨酰肽鏈內(nèi)切mei,最初由 Masaki 等人從土壤細(xì)菌中分離得到。該mei可以特異性剪切賴氨suan殘基C末端和S-氨乙基半胱氨suan殘基的肽鍵,用于蛋白測序和 Lys-X 化合物的mei催化合成。該mei穩(wěn)定性高,在4M尿素或 0.1% SDS 溶液中 30℃ 孵育6小時之后,仍然擁有完整的生物活性。
外觀  | 凍干粉(包含ca. 10% Tris-HCl buffer,pH 8)  | 活性  | 見包裝  | 
分子量  | 27,000(凝膠過濾);30,000 (SDS-PAGE)  | 溶解性  | 易溶于水或緩沖液  | 
優(yōu)良pH  | 9.0-9.5(酰胺mei的優(yōu)良活性 pH)  | 等電點  | 6.9-7.0  | 
抑制劑  | DFP、PMSF、TLCK  | 來源  | 細(xì)菌  | 
穩(wěn)定性  | 溶于pH 值 5.0-12.0 的緩沖液中,可于4℃穩(wěn)定保存。溶于pH 值 6.0-11.0 的緩沖液中,可于30℃穩(wěn) 定保存,但是50℃及以上不穩(wěn)定。  | ||
單位定義  | 一單位酰胺mei(AU)指在30℃ pH 9.5 時每分鐘產(chǎn)生1 μmol 對硝基苯胺所需的mei量。  | ||
底物特異性  | 水解底物:Tos-Lys-Ome、Bz-Lys-NH2、Bz-Lys-pNA、Lys-pNA  | ||
非水解底物:Bz-Arg-NH2、Bz-Arg-pNa、Arg-pNA  | |||
產(chǎn)品編號  | 產(chǎn)品名稱  | 產(chǎn)品規(guī)格  | 產(chǎn)品等級  | 
Wako 125-05061  | Lysyl Endopeptidase®, MS Grade   | 20 μg×5  | 質(zhì)譜級  | 
FUJIFILM Wako質(zhì)譜級賴氨酰肽鏈內(nèi)切酶



